تشخيص و آنتي بيوگرام استافيلوكوكوس ارئوس در نمونه‌ هاي شير غير پاستوريزه استان تهران به روش‌ Multiplex PCR ‌ و مقايسه با كشت ميكروبي

مجله تحقیقات دامپزشکی

دوره 63 - شماره 4

نوع مقاله: Original Article
چكيده: باكتري استافيلوكوكوس ارئوس از شايع‌ترين باكتري‌هاي عامل ورم پستان مي‌باشد كه جهت تشخيص تعداد كم آن در شير نياز به روش‌هاي حساس مي‌باشد. در اين مطالعه روش از واكنش زنجيره‌اي پلي مراز براي تشخيص ژن‌هاي توليد كننده توكسين‌هاي SEA، SEB، SEC كه مختص گونه ارئوس بوده و همچنين ژن حراست شده S rRNA23 كه در تمام استافيلوكوك‌ها مشترك مي‌باشد، استفاده شده است. در نهايت نتايج حاصل از تشخيص ملكولي با روش مرسوم كشت مورد مقايسه قرار گرفته است. ‌ به دليل سختي ديواره باكتري استافيلوكوكوس و عدم تأثير آنزيم‌هاي لايزوزيم، پروتئناز K و موتيلايزين، از روش ازت مايع جهت تجزيه ديواره باكتري استفاده گرديد. تعداد 48 نمونه شيرغير پاستوريزه از دامداري‌هاي حومه استان تهران تهيه و بعد از انجام PCR و كشت بر روي محيط آگار خون دار تعداد 4 نمونه مثبت تشخيص داده شد. نتايج حاصل از آنتي بيوگرام نشان داد كه سيپروفلوكساسين، ريفامپين و جنتامايسن بهترين آنتي بيوتيك‌هاي انتخابي در درمان اورام پستاني ناشي از استافيلوكوكوس طلائي مي‌باشد. حساسيت روش ملكولي با تعداد 10 باكتري در هر ميلي ليتر از محيط كشت در مدت زمان كوتاهي بدست آمد در حاليكه در روش كشت، تعداد 100 باكتري بعد از مدت 48 ساعت قابل تشخيص بود. بيان كننده آن است كه روش ملكولي در مقايسه با روش‌هاي مرسوم حساس و بسيار سريع مي‌باشد.
DETECTION AND ANTIBIOGRAM OF STAPHYLOCOCCUS AUREUS IN NON PASTEURIZED MILK SAMPLES FROM TEHRAN PROVINCE RESTRICTS AND COMPARE TO BACTERIAL CULTURE
Article Type: Original Article
Abstract: Staphylococcus spp., is a common bacteria in cattle mastitis. Detection of the low number of bacteria requires a sensitive method. We used multiplex polymerase chain reaction (m-PCR) assay to detect the genes encoding SEA, SEB, SEC toxins, that are specific in S. aureus bacteria. The gene of 23S rRNA that is conserved in all Staphylococcus spp., also was used. Due to the stiffness and low effective enzyme activity such as lyzozyme, proteinase k, and mutilysine on bacterial cell wall, it was lysed with liquid nitrogen, and multiplex PCR was performed after DNA extraction. The obtained results in molecular method were compared with traditional cell culture. The total number of 48 samples of non pasteurized milk was collected in Tehran province restricts from dairy cattle housing, and 4 positive samples were detected by PCR and microbial cell culture methods. The result of antibiogram showed that Ciprofloxacin, Gentamycin and Rephampine are the best choice of antibiotic for treatment of Staphylococcus spp., mastitis infectious. The accuracy of the test was monitored by using O/N cell culture serial dilution (1 to l06) of Staphylococcus spp., bacteria (OD600=0.02:107 cell). It showed that the sensitivity of PCR is 10 bacteria per ml of cells within few hours, meanwhile in bacterial blood agar cell culture; the number of 100 cells was detected after 48 hours. The result indicates that a molecular technique is more sensitive and rapid compared to traditional bacterial culture method.
قیمت : 20,000 ريال